สรุปขั้นตอนการย้อม IHC โดยใช้ EnVision kit เป็น detection System
DRY SLIDES Imprint/Cytology Smear Slide
ß ß
DEPARAFFINIZATION AND REHYDRATION Air Dry
ß Xylene 3 นาที x3 ß
ß Absolute ethanol 3 นาที x 2 fix0.1%Formal Saline 30 นาที - 2ชั่วโมง
ß 95% ethanol 3 นาที x 2 running ลงน้ำกลั่น 5 นาที ß ล้างน้ำกลั่น
ANTIGEN RETRIEVAL TECHNIQUE - - - - - - - - - -- -- -- -> ช่วงต่อของขั้นตอนใน Cytology Smears
ß TRS : TE buffer, pH 9.0
MW : High power 5 นาที + low power 10 นาที ทิ้งให้เย็นที่ RT 20 นาที (เป่าพัดลมช่วย) *
Running น้ำประปา 1 นาที แล้วลงน้ำกลั่น
ß เช็ดรอบ section แล้ววงด้วย Pen for IHC แล้วลงน้ำกลั่น
ENDOGENEOUS PEROXIDASE BLOCKING
ß 3% H2O2 ในน้ำกลั่น (30% H2O2 1 ml + DW 9 ml เป็นเวลา 10 นาที) **
Running น้ำประปา 5 นาที
WASH BUFFER
ß Wash buffer 5 นาที x 2 *** (dilute c-erb-B2)
NON-SPECIFIC PROTEIN BLOCKING
ß Proteins block serum free X0909 10 นาที เคาะออก
PRIMARY ANTIBODY
ß Primary Antibody Ready- to-use หรือ Negative Control Reagent (diluent)
Incubate 30 นาที ****(เตรียมDAB)
WASH BUFFER
ß Rinse ด้วย Wash Buffer และล้างด้วย Wash Buffer 5 นาที x 2
VISUALISATION SYSTEM
ß EnVision kit 15 นาที *****
WASH BUFFER
ß Wash buffer 5 นาที x 2
SUBSTRATE-CHROMOGEN
ß DAB liquid 5 นาที
STOP REACTION
ß Running น้ำประปา 10นาที แล้วลงน้ำกลั่น
COUNTERSTAIN
ß Mayers Hematoxylin 2 นาที - - - - - - - > Running น้ำประปา 5 นาที
DEHYDRATE -CLEAR MOUNT
สรุปการย้อม Frozen section โดยใช้ EnVision kit
